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气相色谱仪测定血液中DHA、EPA含量

编辑:小T来源:泰特仪器日期:2018-07-12

 

js金沙所有登入网址_9159金沙注册官方网站位于中国武汉,专业从事气相色谱仪的生产、色谱耗材的代理。以下由js金沙所有登入网址_9159金沙注册官方网站色谱技术人员主要先容用气相色谱仪测定血液中DHA、EPA含量。GC2030系列气相色谱仪js金沙所有登入网址_9159金沙注册官方网站最新推出的新一代国产气相色谱仪,技术先进,性能可靠。

二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)是人体血液中的两种物质,对人体的健康有着重要的影响。因此,使用科学方法对血液中DHA,EPA进行检测是非常重要的。使用气相色谱仪对血液中的DHA和EPA进行检测实验,详细先容了实验材料、方法和结果,最终证实,气相色谱仪适用于检测血液中的DHA和EPA。

DHA,即二十二碳六烯酸,俗称脑黄金,是一种对人体非常重要的不饱和脂肪酸,属于Omega-3不饱和脂肪酸家族中的重要成员。EPA ,即二十碳五烯酸,是鱼油的主要成分,属于Ω-3系列多不饱和脂肪酸。目前测定这两种脂肪酸的方法有很多种,而气相色谱仪法是比较常用的一种。通过对气相色谱仪测定血液中DHA,EPA含量进行探讨,以期更准确地测定血液中DHA和EPA的含量。

1 实验材料的准备

试剂:甲醇、乙酸乙酯、正己烷等,均为分析纯;DHA甲酯标准品、EPA甲酯标准品;内标溶液(1 mg/mL,正二十三碳烷酸无水乙醇溶液);盐酸甲醇溶液(氯化钠与浓硫酸反应,产生的氯化氢气体导入甲醇中,经标定物质的量浓度为1.3 mol/L)。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件的选择

毛细管柱:老化过后毛细管柱,型号FFAP,规格30 m(长)×0.25 mm(内径)×0.25μm(液膜厚度)。柱温:初始180 ℃,保持3.0 min,然后2 ℃/min升至250 ℃;汽化室温度260 ℃;检测器温度300 ℃;分流比1∶60;进样量1.0 μL。

2.2 样品处理

用定量移液器取200 μL血清放入5 mL尖底具塞试管内,加入物质的量浓度为4.5 mol/L的浓硫酸2滴酸化,加内标液10 μL,用漩涡混合器混合3 min;用乙酸乙酯漩涡混合提取2次(1 mL和0.5 mL),3 000 r/min离心3 min,合并提取液放入5 mL尖底具塞试管备用;把乙酸乙酯提取液用小流量高纯氮气吹干;加入物质的量浓度为1.3 mol/L的HCL-CH3OH溶液1 mL后密封,置60 ℃恒温水浴箱中酯化30 min后,冷却。加入分析纯的正己烷1 mL,漩涡混合1 min,静置3 min,提取正己烷层放置在5 mL尖底具塞试管内备用,把正己烷提取液用小流量高纯氮气吹干,加30 μL正己烷溶解。

2.3 色谱分离条件的结果

经过试验,在色谱条件下人血清游离脂肪酸甲酯达到完全分离,互不干扰。

2.4 标准曲线配制

质量浓度为1 mg/mL的脂肪酸混合标准溶液,分别用正己烷将DHA混合准溶液稀释成含50 μg/mL、125 μg/mL、250 μg/mL、 500 μg/mL、750 μg/mL、1 000 μg/mL系列质量浓度的标准溶液,将EPA混合准溶液稀释成含10 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、250 μg/mL系列质量浓度的标准溶液。以各标准溶液的质量浓度X(mg/mL)为横坐标,对照品的峰面积Y为纵坐标作图,按内标法计算,得出标准曲线。结果DHA的标准曲线为Y=0.005X+0.004 5,R=0.998;EPA的标准曲线为Y= 0.0062X-0.003 6,R=0.996。

脂肪酸的分析过程较为复杂,其中样品的前期处理过程非常关键。衍生化过程中DHA、EPA的酯化效率决定了两种物质含量检测的准确度。目前脂肪酸酯化的方法有三氟化硼酯化法、甲醇—氢氧化钾室温酯化法、甲醇—氢氧化钠加热回流酯化法和薄层层析法。此次采用了盐酸/甲醇溶液酯化法,DHA、EPA的萃取效率高,可完全分离,互不干扰,保证了结果的准确性。且以正二十三碳烷酸无水乙醇溶液为内标,其保留时间与DHA,EPA相近,能够准确测定DHA,EPA含量。

这种方法精密度和重复性良好,短时间内较稳定,并且在加标回收率试验中,DHA平均回收率为92.0%~93.6%,RSD为3.0%~3.6%,EPA的平均回收率为92.3%~94.0%,RSD为2.8%~4.0%,适用于人血液中DHA,EPA的检测。

 

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